理化检验
取自 食品百科全书
马越峰(诸暨市疾病预防控制中心，浙江诸暨311800)[作者简介] 马越峰(1965-)，男，主管技师，主要从事理化检验研究。
在面粉中添加过氧化苯甲酰(BPO)作为品质改良剂已经十分普遍，有关BPO的危险陛评估已有一些文献报导，测定其在面粉中的含量的方法有高效液相色谱法[1]、气相色谱法[2]等。国家规定的添加量是≤0．06 g／kg[3]。实践中，作为具良好溶解性能的丙酮因自身的物理特性使得在应用上受到限制。本文通过控制合适的样液pH值，用丙酮水溶液作溶剂浸出面粉中的过氧化苯甲酰，以l(I作还原剂将过氧化苯甲酰还原为苯甲酸并在66℃ 水浴1 h挥去大部分丙酮，放冷后定容，取上清液经0．45 tun滤膜过滤后在合理的色谱条件下进色谱仪分析，结果令人满意，并提示在溶剂选用上的更加灵活性。
1 材料与方法
1．1 原理
丙酮虽然是良好的溶剂，但由于在230—420 am波长区域有较强吸收且与苯甲酸较难分离使其作为提取剂在测定面粉中BPO的应用受到限制。然而适当控制样液pH值，以KI溶液作还原剂将过氧化苯甲酰还原为苯甲酸，然后在66~C水浴挥去绝大部分丙酮，冷却后在常温下定容，设定合理的流动相和流速条件将丙酮和苯甲酸彻底分开，并在220 am波长(尽量避开丙酮的峰值吸收)下完成检测。
1．2 仪器与试剂
1．2．1 仪器高效液相色谱仪(岛津LC一10AT溶剂输送泵；SPD10A紫外一可见检测器)，定量管20 ；超声波振荡仪(奥特赛恩斯AP一01)；恒温水浴锅(上海申胜W201一B)；电子天平(德国赛多利斯BV210S)；浙大N2000色谱工作站。
1．2．2 溶剂 苯甲酸标准贮备液(1．0 mg／m1)：准确称取99．5％ 经120℃ 烘干干燥的苯甲酸钠0．118 g加水定容至100 ml。KI溶液(0．5 g／ml现配)；柠檬酸溶液(0．1 g／m1)；丙酮(AR级99．5％)。
1．3 试验方法
1．3．1 色谱条件 色谱柱SUPELCOSIL LC一18 15 cm×4．6 mm，5 Ixm；流动相甲醇：0．02 mo]／L醋酸铵(12：88 v／v)；恒定流速1 ml／min；波长220 am。
1．3．2 样品处理将面粉通过一洁净干燥的漏斗轻轻敲入一干燥的50 ml的容量瓶中，精确称量5．00 g，加入3 ml0．1 g／ml柠檬酸、2 ml 0．5 g／ml KI、10 ml丙酮、20 ml水，超声振荡20 min，置66℃ 水浴1 h，取出放冷，加水定容后静置分层取上清液经0．45 Ixm滤膜过滤进样分析。
1．3．3 标准系列在5只50 ml容量瓶中分别加入含苯甲酸 0．0500 mg／ml的标准使用液各5．oo，10．0，20．0，30．0，40．0 ml (按面粉5 g取样量计，在BPOIO0％ 转换的情况下，相当于在面粉中的含量为0．050，0．100，0．200，0．300，0．400 g／kg)，然后加入3．0 ml 0．1 g／ml柠檬酸，再以蒸馏水定容，各取2 ml经0．45 Ixm滤膜过滤备用。
2 结果与讨论
2．1 最佳分离条件
丙酮在选中的测定波长附近区域有吸收干扰，并且样液经水浴不能彻底挥去丙酮来避免干扰，所以只有将丙酮与苯甲酸(过氧化苯甲酰的转化物)的色谱峰完全分开才是最佳选择。经试验，单纯改变流动相很难把两者分开，而巧妙利用对 样液pH值的控制可有效将两者分开[4]，当柠檬酸的加入量在0．5～2．0 ml时，丙酮与苯甲酸分离度随柠檬酸的加入量的增加而增加，且苯甲酸峰保留时间和苯甲酸峰响应值均相应增加；当柠檬酸的加入量在2．0～4．0 ml时(未作进一步增加柠檬酸试验)，保留时间稳定且分离良好。最终将色谱条件定为：柠檬酸加入量3．0 ml；流动相CH OH：0．02 mo]／L NH Ac(12：88 v／v)；恒定流速1．0 ml／min；检测波长为220 am。其色谱图如图1示。
2．2 波长选定
经分别对丙酮和苯甲酸色谱峰在190～450 am波长范围的频谱扫描，最后确定检测波长为220 13．m，此时丙酮的峰值最小，而苯甲酸在215～235 nm的范围响应值相对恒定。
2．3 方法线性范围
有关文献对过氧化苯甲酰的危险性评估主要针对其转化物苯甲酸，由于本实验中过氧化苯甲酰标准物质来源所限，所以均以苯甲酸标准物作试验，将结果折算为过氧化苯甲酰含量，1 g苯甲酸相当于1 g过氧化苯甲酰。具体这样折算：1 g过氧化苯甲酰即0．00413摩尔(1／242)，相当于0．00826摩尔的苯甲酸(0．00413×2)，即相当于1 g苯甲酸(0．00826×122)。在上色谱条件下对配制的标准系列进行澳0定，求得直线回归方程为Y=9．8956E一9X+7．5840E一10，相关系数0．9993，方法线性范围为0．0050～0．O4O ms／ml(未进一步向上扩展)
2．4 样品测定
任取市面上不同厂商的4种面粉进行加标处理，结果如表1。
3 小结
样品提取剂的选择非常广泛，如何发挥溶剂的特性，避免对测定的干扰，本文作了有益的尝试，结果令人满意。方法可作为对面粉中BPO测定的补充。由于客观条件所限，未作温度因素、提取剂用量、BPO标准物加标等试验，有待后继工作完成。
[参考文献]
[1]靳克林．高效液相色谱测定面粉中过氧化苯甲酰含量：J ．中国卫生检验杂志，2004，14(3)：336．
[2]GB／TI8415—2001．小麦粉中过氧化苯甲酰的测定方法[S]．
[3]GB2760—1996．食品添加剂使用卫生标准[S：．
[4]马越峰．高效液相色谱法测定食品中防腐剂时样液pH值的探讨[J]．上海预防医学，2004，16(9)：450—451．
相关资料：
