透明质酸

取自 食品百科全书

中文名称： 透明质酸

英文名称： HYALURONIC ACID

别名： 玻璃糖醛酸；HA

分 子量：3×105～4×106

性 状：系动物组织中的一种粘多糖，白色纤维状固体，无臭无味。是由鸡冠和脐带中提取而得，分子量较大。易溶于水，不溶于有机溶剂。

测试方法：

1、葡萄糖醛酸测定法

（1）试剂：

①0.025mol/L四硼酸钠硫酸液（Na2B4O7•10H2O）取9.53g四硼酸钠溶于1000mL浓硫酸中，混匀，放置过夜后使用。

②0.12%咔唑无水乙醇液，可在4℃黑暗中保存12个星期。

（2）标准曲线制备：取7支25mL的带塞比色管，分别吸取饱和苯甲酸溶液配制的浓度为50μg/mL的葡萄糖醛酸标准液0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6mL，均用饱和苯甲酸溶液稀释成1.0mL，水浴下小心加入5mL冷却至4℃的四硼酸钠硫酸液，塞好试管，开始缓慢摇动，然后剧烈晃动，同时冷却，保证混合液的温度不超过室温（若忽略冷却这步，混合界面可升至135℃）。在沸水浴中加热10min，放冷至室温，以第一管为空白，测定各反应液在530nm处的吸光度绘制标准曲线。

注1：以硫酸为对照测得空白的吸光度应小于0.025。

注2：一般地，使用新配制的四硼酸钠硫酸液需要新制作标准曲线。

（3）样品葡萄糖醛酸含量的测定：准确称取约20mg样品，加饱和苯甲酸溶液使浓度为0.05%，充分溶解后，吸取样液1mL，加9mL饱和苯甲酸溶液稀释10倍。吸取1mL稀释后的样液，按标准曲线制备操作方法进行测定，平行测定三份取平均值，通过标准曲线读取对应的值，求出葡萄糖醛酸含量。

注：稀释时应注意到，因样液有粘度会使样液残留在吸管口，造成误差，可使用“吹”型吸管，并在已存9mL饱和苯甲酸溶液的试管内，用洗耳球吸洗几次以减少误差。

2、氨基葡萄糖的测定（Elson-Morgan）

（1）试剂：

①3.5mL乙酰丙酮液加46.5mL 0.5mol/L Na2CO3→50mL(冰箱保存)。

②显色剂：对二甲氨基苯甲醛1.6g溶于60mL 1：1的无水乙醇-浓盐酸溶液中。

③盐酸氨基葡萄糖（分析纯）。

（2）标准曲线制备：取6支25mL的带塞比色管，分别加入盐酸氨基葡萄糖标准溶液（0.10mg/mL）0，0.5，0.8，1.2，1.6，2.0mL， 均加水稀释至2.0mL，加入乙酰丙酮1.0mL，沸水浴反应25min，冷却至室温，加入显色剂1.0mL，无水乙醇7.0mL，于60℃下保温1h，冷至室温，以第一管为空白，测定波长为530nm处各反应液的吸光度绘制标准曲线。

（3）样品检测：准确称取样品20mg，置于100mL容量瓶中，加入6mol/L盐酸10mL，置沸水浴水解1h后，冷却至室温，用稀氢氧化钠（1～2mol/L）调至pH7.0加水至刻度，精密吸取2.0mL水解液，按标准曲线制备的操作方法进行测定，平均测定三次取平均值，通过标准曲线读取对应的值后，求出样品中氨基葡萄糖的含量。

注：以Elson-Margan反应为基础的各种糖胺聚糖中己糖胺的含量测定并非定量完成，问题在于酸水解这一步，酸浓度不够或水解不完全，测定值偏低，若水解的酸度过高，结果发生己糖胺的总分破坏，同样是使测定值偏低。经实验认为，用6 mol/L的盐酸在沸水浴中水解1h，聚糖中的己糖胺回收率最高，而此时己糖胺的破坏率相对地最低。

3、粘度的测定（分子量估计）

用减量法称取约50mg样品于干净的锥形瓶中，加去离子水使浓度为0.1%。溶解后，经离心机3500r/min离心5min后，用乌氏粘度计测其粘度（流出时间）。

注1：减重法称样可减少因样品吸潮而带来的误差。

注2：必须完全溶解后再测定，离心是为了保证测定液不含不溶物。

注3：乌氏粘度计的毛细管内径为0.78mm，测定温度为25℃。

注4：如流出时间大于20min，则HA分子量约大于250万，此时晃动0.1%的HA溶液，可见气泡在溶液中上升极为缓慢，小气泡甚至不动。

安全性提示：使用时基本无毒，无刺激性，无过敏反应。

用 途：用于膏霜、乳液、香波等化妆品中，以保持皮肤、头发的水分。具有粘多糖共有的性质，具吸湿性，能结合大量的水。有滋润皮肤、头发和增加光泽的作用，并能防止皮肤皲裂及皱纹的产生。不溶于有机溶剂。

贮藏条件：防止污损，于冰箱中低温贮藏。