凝胶加样缓冲液
取自 食品百科全书
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- | 6×缓冲液 储存温度 | + | 6×缓冲液 储存温度 |
- | Ⅰ 0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF、40%(W/V)蔗糖水溶液 4℃ | + | Ⅰ 0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF、40%(W/V)蔗糖水溶液 4℃ |
- | Ⅱ 0.25溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF、15%聚蔗糖(Ficoll400) 室温 | + | Ⅱ 0.25溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF、15%聚蔗糖(Ficoll400) 室温 |
- | Ⅲ 0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF、30%甘油水溶液 4℃ | + | Ⅲ 0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF、30%甘油水溶液 4℃ |
- | Ⅳ 0.25%溴酚蓝、40%(W/V)蔗糖水溶液、[[碱性加样缓冲液]] 4℃ | + | Ⅳ 0.25%溴酚蓝、40%(W/V)蔗糖水溶液、[[碱性加样缓冲液]] 4℃ |
- | Ⅴ 18%聚蔗糖(Ficoll400)、0.15%溴甲酚绿、0.25%二甲苯青FF 4℃ | + | Ⅴ 18%聚蔗糖(Ficoll400)、0.15%溴甲酚绿、0.25%二甲苯青FF 4℃ |
- | 使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三:增大样品密度;以确保DNA均匀进入样品孔内;使样品呈现颜色,从而使加样操作更为便利,含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍,而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBF作电泳液时,溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同,而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%~1.4%的范围内,这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。 | + | 使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三:增大样品[[密度]];以确保DNA均匀进入样品孔内;使样品呈现颜色,从而使加样操作更为便利,含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍,而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBF作电泳液时,溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同,而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%~1.4%的范围内,这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。 |
选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是,对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料,因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。 | 选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是,对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料,因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。 | ||
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当前修订版本
6×缓冲液 储存温度
Ⅰ 0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF、40%(W/V)蔗糖水溶液 4℃ Ⅱ 0.25溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF、15%聚蔗糖(Ficoll400) 室温 Ⅲ 0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF、30%甘油水溶液 4℃ Ⅳ 0.25%溴酚蓝、40%(W/V)蔗糖水溶液、碱性加样缓冲液 4℃ Ⅴ 18%聚蔗糖(Ficoll400)、0.15%溴甲酚绿、0.25%二甲苯青FF 4℃
使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三:增大样品密度;以确保DNA均匀进入样品孔内;使样品呈现颜色,从而使加样操作更为便利,含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍,而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBF作电泳液时,溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同,而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%~1.4%的范围内,这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是,对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料,因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。